食物中的聚谷氨酸叶酸不能直接被肠道吸收,必须经小肠分泌的结合酶γ左旋-谷酰胺羧基肽酶将它变成单谷氨酸叶酸后方能被人体吸收。吸收的部位主要在空肠近端。十二指肠也能吸收小部分叶酸,但回肠及结肠不吸收。口服人工合成的喋酰谷氨酸,不论剂量大小,约80%可被吸收。
单谷氨酸叶酸口服后很快出现于血液中,1到2小时后达到顶峰。口服多谷氨酸叶酸后,血液中叶酸的高峰出现于2到3小时后。在肠道吸收过程中,叶酸转变成5甲基四氢叶酸,并以这种形式在体内转输和贮存。约1/3或更多为甲基二氢叶酸,其中一小部分与蛋白质结合。