皮质醇测定的方法为：分别于早8时与下午5时和午夜12时取静脉血，测定血浆游离皮质醇的含量或留取24小时尿测定游离皮质醇的水平，血浆皮质醇肾上腺皮质束状带分泌的糖皮质激素，正常人血浆皮质醇的分泌受acth的调节具有一定的昼夜节律。一般于午夜或清晨一点左右分泌最少，血浆含量最低，凌晨4时分泌开始增加，早上六到八时分泌最多，八岁以后逐渐分泌减少，下午五时左右分泌量较清晨最高值比下降50%或以上，分别入血循环中的皮质醇以游离型和蛋白结合型存在称为血浆总皮质醇。
蛋白结合型皮质醇在血浆总皮质醇的90%以上，无生物活性不能进入细胞，通过肝脏时不被分解代谢不被肾小球滤过，游离型皮质醇有生物活性可进入细胞内在肝脏代谢而失去活性并可经肾小球滤过进入尿中。尿中里有皮质醇成含量与血浆游离皮质醇的含量成正比，血浆皮质醇水平升高超过与皮质醇结合球蛋白结合的限度时血浆游离皮质醇的水平就会升高，尿中游离皮质醇的排泄量也急剧升高，影响因素正常口服避孕药雌激素升高引起的皮质醇结合球蛋白会升高，孕期状态下血浆皮质醇也会增高，但节律正常，盲人、夜班者，睡眠不佳者正常昼夜节律消失，苯妥英钠、水杨酸钠、中枢降压药、镇静剂等可使皮质醇水平降低。
